果树学报

2020, v.37(09) 1384-1393

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柑橘黄龙病菌分泌蛋白05150的筛选、原核表达及抗血清制备
Screening and prokaryotic expression of secreted protein 05150 from Candidatus Liberibacter asiaticus and preparation of its antiserum

晏建红;关巍;宾羽;黄洋;周常勇;赵廷昌;

摘要(Abstract):

【目的】柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)是柑橘产业的头号杀手,其病原主要是韧皮部杆菌属亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas),为革兰氏阴性菌,田间主要经亚洲柑橘木虱(Diaphorina citri)传播,为深入研究该病菌分泌蛋白的功能,笔者筛选其中1个分泌蛋白,进行原核表达并制备抗体。【方法】设定4点条件从Prasad等预测的166个分泌蛋白基因中筛选,与pET-28a构建重组表达载体,以原核表达的融合蛋白作为抗原,用于注射兔子,制备多克隆抗体。【结果】从预测的166个分泌蛋白基因中筛选出05150基因,成功构建表达载体pET-28a-05150,表达菌株pET-28a-05150在18℃、0.1 mmol·L~(-1) IPTG浓度条件下诱导的目的蛋白为包涵体。获得的pET-28a-05150抗血清通过ELISA效价为1∶4 000,通过dot ELISA检测手段可与田间感病样品发生显色反应,通过Western blot能与融合蛋白杂交出特异性条带。【结论】该研究筛选了CLas的分泌蛋白基因05150,以其体外表达蛋白制备了pET-28a-05150抗血清,为研究05150基因功能奠定前期基础,也为建立HLB的血清学检测手段及探究柑橘黄龙病菌分泌蛋白基因的筛选方法提供参考。

关键词(KeyWords): 柑橘黄龙病;分泌蛋白基因;原核表达;抗血清制备

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家重点研发计划项目(2018YFD0201500);; 中央本级重大增减支项目(2060302);; 中国农业科学院科技创新工程协同创新任务(CAAS-STCX2016013);; 国家自然科学基金(31701754)

作者(Author): 晏建红;关巍;宾羽;黄洋;周常勇;赵廷昌;

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DOI: 10.13925/j.cnki.gsxb.20200051

参考文献(References):

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