小西葫芦黄花叶病毒外壳蛋白基因植物表达载体的构建Construction of Plant Expression Vector of the Coat Protein Gene of Zucchini yellow mosaic virus from China
胡京昂,古勤生,刘丽锋,张穗,彭斌,李莉
摘要(Abstract)：
小西葫芦黄花叶病毒(Zucchiniyellowmosaicvirus,ZYMV)是危害中国葫芦科作物主要病毒之一。试验以该病毒中国分离物外壳蛋白基因的克隆载体pZCP-87(含ZYMV的CP基因)为材料,经SalⅠ和BamHⅠ双酶切,从胶上回收目的基因,与经过同两种酶酶切的植物表达载体pBIN438连接,转化感受态的大肠杆菌细胞,提取质粒,经PCR和SalⅠ/BamHⅠ双酶切验证,已将该病毒外壳蛋白基因克隆到植物表达载体上(重组质粒命名为pBZCP5),采用冻融法完成了对pBZCP5质粒的农杆菌转化。该工作是通过转基因获得抗ZYMV病毒研究的基础。
关键词(KeyWords)： 外壳蛋白基因;植物表达载体;构建;小西葫芦黄花叶病毒
基金项目(Foundation): 国家“863”项目(2004AA241171);; 河南省科技攻关项目0324050015。
作者(Author): 胡京昂,古勤生,刘丽锋,张穗,彭斌,李莉
参考文献(References)：
- [1]LisaV,BoccardoG,D’AgostinoG,etal.Characterizationofapotyvirusthatcauseszucchiniyellowmosaic[J].Phytopathology,1981,71:667～672.
- [2]LecoqH,PitratM.ClementMIdentificationetcaracterissationd'unpotyvirusprovoquantlamaladiedurabougrissementjaunedumelon[J].Agronomie,1981,1:827～834.
- [3]ULLmanDE,ChoJJ,GermanTL.Occurrenceanddistributionofcu-curbitvirusesintheHawaiianislands[J].PlantDisease,1991,75:367.
- [4]郑光宇,董涛.在新疆发生的小西葫芦黄化花叶病毒的研究初报[J].植物病理学报,1991,21:72.
- [5]古勤生,李怀方,PieroRoggero,等.北方地区小西葫芦黄花叶病毒的酶联检测和西瓜品种抗病性鉴定[J].果树学报,2002,19(3):184～187.
- [6]古勤生,范在丰,李怀方,等.小西葫芦黄花叶病毒外壳蛋白基因的克隆及序列分析[J].植物病理学报,2003,33(6):498～502.
- [7]GuQ,FanZ,RoggeroP,etal.MolecularVariabilityofZucchiniyel-lowmosaicvirusisolatesfromChina[A].2004Proceedingsofthe15thInternationalPlantProtectionCongress[C].Beijing:ForeignLanguagesPress,2004.535.
- [8]SambrookJ,FritschEF,ManiatisT.Molecularcloning:alaboratorymanual.2nded.[M].ColdSpringHarbor:ColdSpringHarborLabo-ratory,1989.
- [9]HofgenR,WillmitzerL.StorageofcompetentcellsforAgrobacteri-umtransformation[J].NucleicAcidsRes,1988,16(20):9877.
- [10]马国斌.西瓜甜瓜体细胞无性系的发生、变异与遗传转化研究[D].陕西杨陵:西北农林科技大学,1997.