果树学报

2012, v.29(03) 343-349+524

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根癌农杆菌介导的‘魏可’葡萄遗传转化体系的优化
Optimizing conditions for Agrobacterium tumefaciens mediated transformation of ‘Wink’ grapevine

余智莹;张平;徐志胜;孙兴民;章镇;陶建敏;

摘要(Abstract):

以‘魏可’葡萄离体叶片为外植体,利用植物表达载体上含有卡那霉素抗性基因(nptⅡ)的根癌农杆菌LBA4404(pCAMBIA2301)对影响‘魏可’葡萄遗传转化效率的因素进行系统研究。结果表明,最佳农杆菌介导‘魏可’葡萄遗传转化体系为农杆菌侵染4 min,共培养3 d,卡那霉素质量浓度5 mg·L-1,羧苄青霉素质量浓度200 mg·L-1。采用此体系对‘魏可’葡萄进行转化,共获得9株抗性苗。利用GUS组织化学染色、PCR扩增的方法检测,结果表明,有4株通过了PCR检测,1株通过了RT-PCR检测,初步证明nptⅡ基因已经整合进入‘魏可’葡萄基因组中。将PCR产物回收,经测序验证nptⅡ基因完全整合进入‘魏可’葡萄基因组中。对CK及经PCR检测呈阳性的株系进行卡那霉素抗性鉴定,发现PCR呈阳性的株系均比CK抗Kan的能力明显增强。

关键词(KeyWords): ‘魏可’葡萄;农杆菌介导法;nptⅡ基因;转化体系;分子检测;卡那霉素抗性鉴定

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家葡萄产业技术体系(CARS-30);; 江苏省科技厅(BE2009314-2);; 江苏省农业科技自主创新资金CX(10)110

作者(Author): 余智莹;张平;徐志胜;孙兴民;章镇;陶建敏;

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