果树学报

2013, v.30(02) 185-190

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桃果实PpCuZnSOD基因的原核表达、纯化与鉴定
Prokaryotic expression, purification and characterization of PpCuZnSOD gene of Prunus persica

吴军帅;丛丽君;段艳欣;董晓颖;王滨;李培环;

摘要(Abstract):

【目的】为了实现桃铜锌超氧化物歧化酶在大肠杆菌中的高效表达,获得表达稳定、蛋白纯度高、活性强的工程菌,【方法】将前期获得的PpCuZnSOD基因(GenBank登录号:JX217743)重组到原核表达载体pET-32a(+)中,并转化到Escherichia coli BL21(DE3)宿主菌,经IPTG进行诱导表达。对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测,镍柱亲和层析纯化,并采用Brad Ford方法测定融合蛋白浓度,黄嘌呤氧化法分析其酶活。【结果】成功的构建了原核表达载体pET-32a(+)-PpCuZnSOD,并获得分子质量约为35 kDa的诱导表达产物,纯化后融合蛋白浓度为183.7 mg·L-1,活性为5.23×103U·mg-1。【结论】成功构建了桃pET-32a(+)-PpCuZnSOD原核表达载体,表达量高、稳定性强,重组表达产物具有较高CuZnSOD酶活性,为桃CuZnSOD酶的进一步研究奠定了基础。

关键词(KeyWords): 桃;PpCuZnSOD;原核表达;纯化;鉴定

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金青年科学基金(NSFC,30900976);; 山东省高等学校科技计划(J12LF06)

作者(Author): 吴军帅;丛丽君;段艳欣;董晓颖;王滨;李培环;

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