果树学报

2013, v.30(04) 578-581

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利用原核表达的外壳蛋白制备草莓轻型黄边病毒抗血清
Preparation of antiserum against strawberry mild yellow edge virus (SMYEV) with coat protein expressed in Escherichia coli

代红艳;于翠梅;张志宏;李贺;马跃;刘月学;

摘要(Abstract):

【目的】探索以原核表达的草莓轻型黄边病毒(SMYEV)外壳蛋白(CP)为抗原制备抗血清的方法,从而建立利用ELISA检测SMYEV的技术体系。【方法】利用IPTG诱导SMYEV CP重组蛋白在大肠杆菌中表达,分离纯化重组蛋白并以其为抗原对新西兰兔进行免疫。血清效价达到要求后,分离纯化抗血清并利用DAC-ELISA对草莓植株进行SMYEV检测,同时利用RT-PCR对DAC-ELISA检测结果进行验证。【结果】宿有SMYEV CP基因的大肠杆菌经IPTG诱导后出现一条52.0 ku左右的特异性重组蛋白谱带,以纯化的重组蛋白为抗原制备出专一性较强的针对SMYEV的抗血清,该抗血清稀释800倍后仍能有效检测草莓植株中的SMYEV。利用DAC-ELISA和RT-PCR对26份草莓试材分别进行SMYEV检测,2种检测方法的检测结果基本一致。【结论】以原核表达的SMYEV CP为抗原可以制备出专一性较强、效价较高的SMYEV的抗血清。

关键词(KeyWords): 草莓轻型黄边病毒(SMYEV);CP;原核表达;抗血清;ELISA

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家科技支撑计划课题(2011BAD12B02)

作者(Author): 代红艳;于翠梅;张志宏;李贺;马跃;刘月学;

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