果树学报

2013, v.30(01) 1-7

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新疆红肉苹果PGIP基因的克隆及原核表达
Cloning and expression in E.coli of polygalacturonase-inhibiting protein gene in Malus sieversii f.neidzwetzkyana

孙华;王春燕;宋杨;吴树敬;张芮;冯守千;陈晓流;陈学森;

摘要(Abstract):

【目的】研究克隆新疆红肉苹果[Malus sieversii f.neidzwetzkyana(Dieck)Langenf]PGIP基因并进行原核表达,探讨其抗病机制。【方法】根据Genbank中已经发表的‘金冠’苹果PGIP保守区域设计1对特异引物,以新疆红肉苹果叶片总RNA为模板,T/A克隆后进行序列测定,并对该序列进行分析。随后将该蛋白成熟肽cDNA片段连接到原核表达载体pET30a(+)中,构建融合表达质粒,转化到E.coli BL21(DE3)中进行表达。【结果】序列分析表明,新疆红肉苹果PGIP基因cDNA编码区全长993 bp,编码330个氨基酸残基,命名为MsPgip,GenBank登录号为JQ001783。MsPgip分子质量为36.6 kD,等电点为7.05,有6个潜在的N-糖基化位点,信号肽为N端24个氨基酸残基。该蛋白质还具有2个连续的24个氨基酸残基大小的LRR基序(LSQLKNLTFLDLSFNNLTGAIPSSLSQ LPNLNALHLDRN-KLTGHIPIS)。与已克隆的‘澳洲青苹’、‘金冠’、‘富士’苹果PGIP氨基酸序列同源性均高达99%。原核表达产物经SDS-PAGE分析表明,表达蛋白的分子质量与预期一致。【结论】克隆了新疆红肉苹果PGIP基因,并可在大肠杆菌中表达。

关键词(KeyWords): 新疆红肉苹果;多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白;基因克隆;表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家重点基础研究发展计划课题(2011CB100606);; 国家自然科学基金项目(31171932)

作者(Author): 孙华;王春燕;宋杨;吴树敬;张芮;冯守千;陈晓流;陈学森;

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参考文献(References):

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