果树学报

2012, v.29(04) 695-701

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两步多重RT-PCR快速检测苹果潜隐性病毒
Quick detection of apple latent viruses by two-step multiplex RT-PCR assay

陈红霞;邵建柱;孙建设;曹晓凤;乔雪华;

摘要(Abstract):

【目的】为建立检测3种苹果潜隐性病毒更为快速准确的方法,【方法】以携带苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)和苹果茎痘病毒(ASPV)的成龄苹果树韧皮部为试材,根据基因库中苹果茎痘病毒(Apple stempitting virus,ASPV)的外壳蛋白基因序列,设计合成了2对特异性引物,分别与合成的苹果茎沟病毒(ASGV)引物和苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)的引物组合配伍,筛选出最佳的引物对组合。对cDNA的合成所用引物和总RNA模板进行遴选和量化,对PCR过程中cDNA的用量、引物对的终浓度、退火温度等主要影响因素进行优化。【结果】结果表明,反转录引物为Oligo(dT)18、总RNA 0.1~3.0μL时,可以得到较好的cDNA;ASPV-FR与ASGV-Pch、ACLSV-Pch引物组合优于ASPV-Pch,并且筛选出4组最佳的终浓度处理组合;cDNA用量为2.0~4.0μL、退火温度为50.0~52.9℃、循环数为35时,扩增效果较好。采用优化的多重RT-PCR体系对采自陕西和山东两省的样品进行检测,并用3种病毒的单重RT-PCR体系进行验证。【结论】结果呈现高度一致性,充分印证了该多重RT-PCR体系的准确性,适用于大量样品的快速检测。

关键词(KeyWords): 苹果病毒;苹果茎沟病毒;苹果茎痘病毒;苹果褪绿叶斑病毒;两步多重RT-PCR

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家苹果产业技术体系项目(CARS-28)

作者(Author): 陈红霞;邵建柱;孙建设;曹晓凤;乔雪华;

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参考文献(References):

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