果树学报

2009, v.26(01) 108-112

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正交设计优化果梅ISSR反应体系
Optimization of an ISSR reaction system of Japanese apricot (Prunus mume) based on orthogonal design

桂腾琴;孙敏;乔爱民;王心燕;

摘要(Abstract):

以果梅(PrunusmumeSieb.etZucc.)品种鸳鸯梅为试材,采用改良的CTAB法提取果梅嫩叶DNA,利用正交设计L16(45)探讨Mg2+、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶及模板DNA用量对果梅ISSR-PCR反应的影响,正交试验的结果采用直观分析和方差分析相结合。建立了果梅的ISSR-PCR优化反应体系,在20μL反应体系中含2μL10×Buffer,2.5mmol·L-1Mg2+,0.2mmol·L-1dNTPs,0.32μmol·L-1引物,20~80ng模板DNA,0.75UTaqDNA聚合酶。在此基础上探讨了引物UBC840的最适退火温度、最佳循环次数及延伸时间,引物UBC840的最适退火温度为50.6℃。应用该优化反应体系,用2个不同引物对19份果梅资源DNA进行ISSR-PCR扩增,结果显示优化的反应体系具有较高的稳定性。

关键词(KeyWords): 果梅;简单序列重复区间(ISSR);正交设计;反应体系

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 广东省科技计划项目(2007A020300002-6)

作者(Author): 桂腾琴;孙敏;乔爱民;王心燕;

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