果树学报

2003, (01) 35-39

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刺梨及其近缘种PCR实验体系的建立与优化
Establishment and Optimization of PCR Technical System in Rosa roxburghii and Its Relatives

文晓鹏,2邓秀新

摘要(Abstract):

以刺梨及其近缘种月季为试材,进行了RAPD-PCR实验参数的确立和优化试验。结果表明,刺梨及月季25μL反应体系的最优组成为2.5μL10×反应缓冲液,2mmol/LMg2+,0.2mmol/LdNTP,1.6mg/L模板DNA,0.4μmol/L随机引物和1.2UTaqDNA多聚酶。经PCR扩增验证,此反应体系亦适宜于刺梨的部分近缘种,可有效用于RAPD分析;通过将退火温度提高至50℃或采用“Touchdown”扩增程序,并在50μL反应体系中适当增加特异引物对浓度(1.0μmol/L),模板DNA(4.0mg/L)和TaqDNA多聚酶(3.0U/管)的使用量,建立起适合于刺梨特异DNA片段检测及回收的特异PCR扩增实验体系,为刺梨的分子克隆奠定了技术基础。

关键词(KeyWords): 刺梨;近缘种;PCR扩增;实验体系

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金;;贵州省自然科学基金资助项目。

作者(Author): 文晓鹏,2邓秀新

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参考文献(References):

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