果树学报

2019, v.36(12) 1763-1770

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发根农杆菌介导西瓜转基因过表达体系的建立
Preliminary study on Agrobacterium rhizogenes-mediated gene overexpression system in watermelon

王平勇;徐永阳;赵光伟;贺玉花;孔维虎;张健;刘水苗;户克云;侯冲;王兰菊;徐志红;

摘要(Abstract):

【目的】建立发根农杆菌介导的西瓜转基因不定根过表达体系。【方法】探索利用野生型发根农杆菌K599侵染西瓜材料'Sugar Baby',诱导西瓜产生不定根的实验方法。借助该方法,将含有GUS基因和EGFP基因的过表达载体pCAMBIA3301和pCAMBIA1300-ProSuper导入发根农杆菌K599,侵染西瓜材料'Sugar Baby',通过常规PCR、qRTPCR、GUS染色和激光共聚焦显微镜检测,评价该过表达体系的效果。【结果】利用野生型和导入外源质粒的发根农杆菌均能成功诱导西瓜'Sugar Baby'产生不定根。PCR检测结果显示,携带pCAMBIA3301和pCAMBIA1300-ProSuper载体的发根农杆菌K599诱导产生的不定根阳性率达到100%。qRT-PCR、GUS染色和激光共聚焦显微镜检测均能成功检测到GUS基因和EGFP基因的过量表达。【结论】利用发根农杆菌K599诱导西瓜产生不定根介导基因过表达的方法,具有周期短,操作方便,转化率高的特点,可实现基因功能的快速验证,为西瓜根系相关基因的功能研究提供技术支持。

关键词(KeyWords): 西瓜;发根农杆菌;K599;过表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金(31801888);; 国家西甜瓜产业技术体系项目(CARS-25);; 中国农业科学院科技创新工程专项经费项目(CAAS-ASTIP-2019-ZFRI);; 河南省现代农业产业技术体系项目(S2014-11-G03);; 中央级科研院所基本科研业务费专项(1610192019201)

作者(Author): 王平勇;徐永阳;赵光伟;贺玉花;孔维虎;张健;刘水苗;户克云;侯冲;王兰菊;徐志红;

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