果树学报

2008, (04) 577-580

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鸭梨多酚氧化酶基因CDS区的克隆及表达
Cloning and expression of polyphenol oxidase gene of CDS from Yali pear

李桂琴;李会宣;许冬倩;刘坤;张玉星;

摘要(Abstract):

以鸭梨(Pyrus bretschneideri Rehd.)果皮基因组DNA为模板,根据已经发表的多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)基因保守序列设计引物,利用PCR技术,克隆得到鸭梨多酚氧化酶编码区序列,将此核酸序列克隆到载体pGEM-T,酶切鉴定后测序,结果表明该段序列含有1782个核苷酸,编码593个氨基酸。对鸭梨多酚氧化酶基因片段的一致性分析和进化树分析表明,该片段与沙梨(Pyrus pyrifolia,AB056680)、苹果(Malus domestica,L29450)、李(Prunuss alicina,AY866432)以及杏(Prunus armeniaca,AF020786)的一致性分别为99%、96.3%、82%和51.4%,绘制的进化树和形态学分类地位相一致。将该片段连接到表达载体pET39b上,获得的重组子命名为pET39b-PPO,热激法转化表达受体大肠杆菌BL21(DE3)菌株,用IPTG进行诱导。SDS-PAGE分析表明,PPO基因在大肠杆菌中被诱导表达蛋白质相对分子质量约66ku,检测表明具有多酚氧化酶的活性。

关键词(KeyWords): 鸭梨;多酚氧化酶;基因克隆;表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 河北省科技攻关项目(042401116D-2)

作者(Author): 李桂琴;李会宣;许冬倩;刘坤;张玉星;

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