果树学报

2017, v.34(02) 137-144

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沙梨PpGAI3基因的分离与原核表达分析
Isolating and prokaryotic expression analysis of the PpGAI3 gene in Pyrus pyrifolia

刘杭;王芳;李亮;王文婷;杨贺忠;马鑫瑞;吴少华;李永裕;

摘要(Abstract):

【目的】分离沙梨DELLA蛋白编码基因PpGAI3,探究其蛋白在花芽休眠中的表达情况。【方法】从不同需冷量沙梨品种‘蜜雪梨’和‘黄花梨’中分离PpGAI3基因,重组到p EASY-Blunt E1表达载体中,转化BL21(DE3)宿主菌后经IPTG诱导表达,并对表达菌株进行SDS-PAGE和Western blotting检测。【结果】获得2种沙梨的PpGAI3基因,分别命名为PpGAI3mx和PpGAI3hh,Gen Bank登录号为KU954535和KX078215,其开放阅读框(ORF)为1 641 bp,编码546个氨基酸,预测其为亲水性不稳定蛋白。进化树分析表明PpGAI3mx和PpGAI3hh与白梨的亲缘关系最近;成功构建了p EASY-Blunt E1-PpGAI3原核表达载体,得到蛋白分子质量约60 ku的诱导表达产物。【结论】所得沙梨DELLA蛋白编码基因PpGAI3为植物DELLA蛋白家族中的成员,在梨花芽休眠过程中具有特异表达,且表达产物大部分以不溶性包涵体形式存在。

关键词(KeyWords): 沙梨;休眠;DELLA蛋白;PpGAI3;原核表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金(31501694);; 高等学校博士学科点专项科研基金(20113515110011)

作者(Author): 刘杭;王芳;李亮;王文婷;杨贺忠;马鑫瑞;吴少华;李永裕;

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参考文献(References):

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