果树学报

2016, v.33(03) 366-373

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葡萄炭疽病可视化LAMP检测体系的建立及应用
Establishment and application of visual loop-mediated amplification assay on Colletotrichum gloeosporioides

王贤达;郑巧美;陈婷;刘鑫铭;蔡盛华;范国成;雷龑;

摘要(Abstract):

【目的】建立葡萄炭疽病LAMP检测方法。【方法】在葡萄炭疽病菌ITS序列片段设计LAMP特异性引物,优化反应条件,建立葡萄炭疽病LAMP检测体系,并利用荧光显色剂(0.05 mmol·L-1钙黄绿素和0.5 mmol·L-1氯化锰混合液)实现检测结果的可视化;同时对该体系进行特异性和灵敏度的验证,对采集自5个地区的田间样品进行实测。【结果】除染病的待检样品有特异性反应,观察到亮绿色荧光信号外,其他供试菌株均无特异性扩增反应;对葡萄发病组织总DNA的检测灵敏分别是定量PCR和常规PCR的1/10和100倍,检测限达到了5×10-4mg·L-1;对来自福建等5个地区的样品进行实测,结果表明待检样品中有81.5%感染葡萄炭疽病菌,该检测结果与定量PCR的检测结果完全一致。【结论】本研究建立了一种基于荧光显色的可视化LAMP检测体系,该体系可用于葡萄炭疽病的田间样品检测。

关键词(KeyWords): 葡萄炭疽病;钙黄绿素;环介导等温扩增(LAMP);检测

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-30);; 福建省自然科学基金(2013J01100);; 福建省农业科学院青年人才创新基金(2014CX-7)

作者(Author): 王贤达;郑巧美;陈婷;刘鑫铭;蔡盛华;范国成;雷龑;

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参考文献(References):

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