果树学报

2006, (02) 252-255

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葡萄卷叶伴随病毒-3复制酶基因克隆及其在大肠杆菌中的表达
Cloning and expression in E. coli of grapevine leaf-roll associated virus-3 RdRp gene

徐章逸;王国平;洪霓;

摘要(Abstract):

以感染有葡萄卷叶伴随病毒-3(Grapevineleafroll-associatedvirus-3,GLRaV-3)的葡萄韧皮部组织中提取到的dsRNA为模板,利用RT-PCR和重叠延伸PCR技术,对GLRaV-3的复制酶(RNA-dependentRNApolymerase,RdRp)基因进行克隆,获得了预期大小的目标片段。将此片段克隆到载体pBluescriptSKⅡ,酶切鉴定后测序。测序结果表明:RdRpcDNA全长为1618bp。经BLAST分析推导其可能编码538个氨基酸,与报道的GLRaV-3美国分离物NY1RdRp核苷酸相似性为99.3%,氨基酸相似性为99.6%;推导的氨基酸序列与其同属的PMWaV-2、GLRaV-1和LChV-2的RdRp氨基酸序列相似性分别为53%,50%和38%,包含了GDD在内的8个保守基元序列。将该段RdRp连接到表达载体pET22b(+)上,获得的重组子pET-RdRp转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS后,用1mmol/L的IPTG进行诱导。SDS-PAGE分析表明,RdRp在大肠杆菌中被诱导表达,融合蛋白分子量约为61kDa。

关键词(KeyWords): 葡萄卷叶伴随病毒-3;复制酶;反转录-聚合酶联反应;原核表达

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 科技部863课题资助项目(2001AA241142)。

作者(Author): 徐章逸;王国平;洪霓;

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