果树学报

2017, v.34(09) 1069-1075

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柑橘体细胞胚发生基因CsHB1特异肽段多克隆抗体的制备及其蛋白动态检测
Preparation of CsHB1 polyclonal antibody and its protein dynamic changes during somatic embryogenesis in Citrus

谢幸男;赖晓娜;战爽;程来超;许全全;葛晓霞;

摘要(Abstract):

【目的】构建柑橘HD-ZIP II转录因子CsHB1基因的原核表达系统,制备多克隆抗体,并检测抗体在‘伏令夏橙’胚性愈伤体胚诱导阶段中的特异性,为研究CsHB1基因在柑橘体细胞胚发生过程中的功能奠定基础。【方法】构建柑橘HD-ZIP II转录因子CsHB1基因的原核表达载体p GEX4T-CsHB1-N,转化大肠杆菌诱导目的融合蛋白的表达,并制备获得多克隆抗体anti-CsHB1-N。通过Western blot检测抗体在原核表达系统和柑橘体细胞胚诱导阶段的特异性,并分析体细胞胚诱导阶段CsHB1蛋白水平表达的动态变化。【结果】重组原核表达载体p GEX4T-CsHB1-N在Escherichia coli中高效表达出了分子质量约为49 ku的GST-CsHB1-N融合蛋白,并纯化获得多克隆抗体anti-CsHB1-N;经过Western blot分析表明,多克隆抗体可与‘伏令夏橙’愈伤体胚诱导阶段表达的目的蛋白特异结合;蛋白表达结果分析表明,在胚性愈伤组织中CsHB1蛋白呈现高的表达量,随着诱导培养的进行,呈现了先下降后上升的波动变化。【结论】多克隆抗体特异性好,可与‘伏令夏橙’胚性愈伤组织中目的蛋白特异性结合,可用于CsHB1基因功能分析。

关键词(KeyWords): 柑橘;CsHB1;多克隆抗体;动态分析

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金青年基金(31201611);; 湖北省自然科学基金(2016CFB390)

作者(Author): 谢幸男;赖晓娜;战爽;程来超;许全全;葛晓霞;

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