果树学报

2008, (04) 548-551

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甜瓜蔗糖磷酸合成酶基因全克隆及工程载体的构建
Gene cloning of melon sucrose phosphate synthase and construction of plant engineering vector

侯丽霞;何启伟;赵双宜;焦自高;王崇启;董玉梅;

摘要(Abstract):

蔗糖磷酸合成酶在甜瓜果实蔗糖合成途径中起关键性的调节作用,克隆该基因并导入甜瓜低糖自交系,可改良甜瓜果实品质创新优良种质。从甜瓜幼苗叶片提取总RNA,利用RT-PCR与Southern blot方法相结合,重组子质粒经限制性内切酶酶切和PCR验证以及测序同源性比较,克隆到基因的5’(2859bp)和3’(852bp)。应用高保真Taq聚合酶PCR拼接蔗糖磷酸合成酶完整cDNA序列3692bp,该片段与GenBank中其它植物基因序列具有97% ̄99%的同源性,登录号DQ364058。应用BamHⅠ、KpnⅠ、BglⅡ限制性酶切获得植物双元表达载体pROK2及基因的线性片段,通过T4连接酶反应,构建了以CaMV35S为启动子,以Tnos为终止子的工程载体pROK-SPS,该载体含有Npt-II选择标记基因。

关键词(KeyWords): 甜瓜;蔗糖磷酸合成酶;基因克隆;工程载体

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 山东省农业良种工程项目—蔬菜种质资源创新(鲁科农字[2004]113号)

作者(Author): 侯丽霞;何启伟;赵双宜;焦自高;王崇启;董玉梅;

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