果树学报

2018, v.35(11) 1324-1334

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miR171家族成员分子特性及miR171b调控靶标在龙眼体胚发生早期的表达分析
Molecular characteristics of miR171 family members and analysis of the expression pattern of miR171b regulatory targets during early somatic embryogenesis in longan

苏立遥;张帅;陈旭;徐小萍;赖钟雄;林玉玲;

摘要(Abstract):

【目的】研究龙眼miR171家族的分子特性及miR171b调控靶标对GA3、2,4-D的响应和在龙眼体胚发生早期的表达模式。【方法】通过龙眼基因组和转录组数据库筛选得到龙眼miR171成熟体与前体序列,基于邻近法(neighborjoining,NJ)利用MEGA 7.0以及iTOL进行系统发育树的构建以及序列多重比较分析;psRNAtarget预测龙眼miR171家族靶基因,利用改良的RLM-RACE验证靶基因裂解位点;利用qPCR分析不同浓度2,4-D、GA3处理的龙眼胚性愈伤组织(EC)及龙眼体胚发生早期miR171b与其靶基因SCL6(Scarecrow-like)的表达模式。【结果】分子特性分析提示,龙眼miR171各成员之间的进化关系较远,进化来源复杂,进化速率具有差异性;靶基因预测显示miR171家族靶基因主要包括SCL6、SCL15、SCL27、转录剪切体X2和RNA依赖的RNA聚合酶1等;裂解位点验证表明miR171b可以靶向切割SCL6,同时SCL27具有结合位点之外的切割位点。在不同浓度2,4-D和GA3处理下,miR171b与SCL6的表达趋势基本呈现为负调控模式;随着2,4-D浓度的升高,miR171b的转录水平总体呈下调趋势,SCL6的表达量总体呈上调趋势;GA3的存在显著下调miR171b的转录水平,而SCL6的表达量分别在2.5和12.5 mg·L~(-1)GA3时达到最高值和最低值。龙眼早期体胚发生前期(0~6 d),miR171b与SCL6表达模式相似,龙眼早期体胚发生后期(6~12 d),miR171b显著下调,SCL6显著上调,提示大量积累的SCL6对龙眼球形胚(GE)形态建成具有重要作用,而miR171b通过减少转录产物的积累促进SCL6表达。【结论】miR171具有物种间的保守性以及成员间的差异性,同时miR171b及其靶标SCL6通过响应激素调节龙眼早期体胚发生的形态建成。

关键词(KeyWords): 龙眼;miR171;分子特性;SCL6;激素响应;体胚发生

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 福建省自然科学基金杰出青年基金(2015J06004);; 国家自然科学基金(31672127,31572088)

作者(Author): 苏立遥;张帅;陈旭;徐小萍;赖钟雄;林玉玲;

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