果树学报

2009, v.26(01) 103-107

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锥栗自然居群ISSR-PCR分析技术的建立
Establishment of inter -simple sequence repeat reaction system in Castanea henryi

刘国彬;龚榜初;罗正荣;

摘要(Abstract):

提取野生锥栗的基因组DNA作为ISSR-PCR模板,对反应体系中的模板用量、Mg2+浓度、dNTPs浓度、引物浓度和TaqDNA聚合酶用量5个主要影响因素进行梯度试验,并对扩增程序中的退火温度与循环次数进行了探讨,初步确立了适合野生锥栗的ISSR-PCR分析技术体系,即25μL反应体系中,模板DNA40或50ng、Mg2+2.25mmol.L-1、dNTPs0.2mmol.L-1、引物0.2μmol.L-1、TaqDNA聚合酶1.0U;PCR扩增程序为:94℃预变性3min;然后94℃变性45s,(Tm+2~4℃)退火45s,72℃延伸2min,共32个循环;最后72℃充分延伸5min;1.5%琼脂糖凝胶电泳分离扩增产物。

关键词(KeyWords): 锥栗;自然居群;ISSR

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家农业科技成果转化资金项目“锥栗优良新品种中试与产业化示范”(2007GB24320385);; 国家林业局重点项目“锥栗优良新品种示范”([2007]-74号)

作者(Author): 刘国彬;龚榜初;罗正荣;

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参考文献(References):

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