果树学报

2019, v.36(07) 939-946

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流式细胞仪测定荔枝倍性和基因组大小的细胞核提取液筛选与应用
Nuclear isolation buffer optimization and the determination of ploidy level and genome size of litchi using flow cytometry

赖彪;吴传龙;秦永华;刘成明;冯奇瑞;叶自行;胡桂兵;王惠聪;

摘要(Abstract):

【目的】流式细胞术是目前测定植物倍性和基因组大小差异的最快、最有效的方法。建立适合荔枝的流式细胞术的方法,对荔枝倍性育种以及基因组大小的确定是必不可少的。【方法】笔者以荔枝的幼嫩叶片为材料,筛选适合荔枝的细胞核提取液配方,建立利用流式细胞仪测定荔枝倍性和基因组大小的方法。用改进的标准两步法,比较了6种常用细胞核提取液提取细胞核的效果。【结果】利用WPB(Woody Plant Buffer)提取的大部分荔枝品种(品系)叶片细胞核稳定、分辨率高、细胞碎片少且细胞G0/G1峰的变异系数(CV)较低,平均CV值为5.12%,说明该配方适用于酚类物质丰富的荔枝细胞核的提取。同时以已知染色体数量的‘无核荔’(2n=30)为外标,检测了18个品种(品系)的倍性,发现参测样品的G0/G1峰与‘无核荔’G0/G1峰的荧光均值的比值为0.78~1.24,说明所测荔枝品种(品系)均为二倍体。以已知基因组大小的‘Stupicképolnírané’番茄为内标测定了14个品种(品系)的基因组大小,结果表明荔枝基因大小约为550~620 Mb,平均602 Mb,不同荔枝品种(品系)间基因组大小存在一定差异。【结论】WPB细胞核提取液提取的荔枝幼嫩的叶片的细胞核质量好,可用于流式细胞术荔枝倍性和基因组大小的测定,测定的结果显示参测荔枝品种(品系)均为二倍体,无单倍或多倍的情况,不同荔枝品种基因组大小有一定的差异。

关键词(KeyWords): 荔枝;流式细胞术;细胞核提取液;倍性;基因组大小

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家现代农业产业技术体系建设专项资金资助项目“国家荔枝龙眼产业技术体系”(CARS-33);; 长江师范学院校级科研项目(2016KYQD20和2016XJQN06)

作者(Author): 赖彪;吴传龙;秦永华;刘成明;冯奇瑞;叶自行;胡桂兵;王惠聪;

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DOI:

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