果树学报

2007, (02) 237-243

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TAIL-PCR方法快速克隆银杏查尔酮合成酶基因及序列分析(英文)
Efficient amplification and sequence analysis of chalcone synthase gene from Ginkgo biloba by thermal asymmetric interlaced PCR

许锋;程水源;王燕;李琳玲;程述汉;

摘要(Abstract):

热不对称交错PCR(TAIL-PCR)方法已广泛应用于从多种生物克隆已知DNA序列的侧翼序列。对传统的TAIL-PCR方法进行改良:(1)将TAIL技术应用于TAIL-PCR中第3步PCR循环。(2)以10bp的随机简并引物即RAPD引物代替基因侧翼简并引物。以银杏品种家佛手的叶基因组DNA为模板,利用简并引物克隆到银杏查尔酮合成酶基因(CHS)片段序列Gbchs1,以此序列设计3条特异引物,利用改良的热不对称交错PCR方法克隆到CHS基因Gbchs2。结果表明,Gbchs2长1238bp,编码304个氨基酸并包含3’末端序列。GbCHS2蛋白质序列与其他植物的CHS蛋白质序列高度同源,包含CHS蛋白质保守的环化作用活性位点,催化活性位点、香豆素活性位点、及催化活性基序。改良后的TAIL-PCR方法为基因全长的克隆提供了一种简单快速高效的新方法。

关键词(KeyWords): 银杏;热不对称交错PCR;查尔酮合成酶基因;克隆;序列分析

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 教育部新世纪优秀人才计划(NCET-04-0746);; 教育部地方重点攻关项目(02095);; 湖北省自然科学基金(2002AB094);; 湖北省青年杰出人才基金(2003AB014);; 湖北省教育厅重大科技项目(Z2006270002)

作者(Author): 许锋;程水源;王燕;李琳玲;程述汉;

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